Ny iray amin'ireo tombony lehibe indrindra amin'ny kolontsaina sela dia ny fahafahana manodinkodina ny simika ara-batana amin'ny fananahana sela (izany hoe ny mari-pana, ny pH, ny tsindry osmotika, ny fihenjanana O2 sy ny CO2) ary ny tontolo iainana ara-batana (izany hoe ny hormonina sy ny fifantohana otrikaina).Ankoatra ny mari-pana, ny tontolon'ny kolontsaina dia fehezin'ny fitaovana fitomboana.
Na dia tsy mazava toy ny tontolo ara-batana sy simika aza ny tontolo ara-batana amin'ny kolontsaina, ny fahatakarana tsara kokoa ny singa serum, ny famantarana ny fitomboana ilaina amin'ny fitomboana, ary ny fahatakarana tsara kokoa ny microenvironment ny sela ao amin'ny kolontsaina.(izany hoe fifaneraserana amin'ny sela sela, fiparitahan'ny gazy, fifaneraserana amin'ny matrix) dia mamela ny tsipika sela sasany ho kolontsaina amin'ny haino aman-jery tsy misy serum.
1. Ny tontolon'ny kolontsaina dia misy fiantraikany amin'ny fitomboan'ny sela
Mariho fa tsy mitovy ny fepetran'ny kolontsaina sela ho an'ny karazana sela tsirairay.
Ny vokatry ny fialana amin'ny fepetra kolontsaina ilaina amin'ny karazana sela manokana dia manomboka amin'ny fanehoana ireo phenotypes tsy ara-dalàna ka hatramin'ny tsy fahombiazan'ny kolontsaina sela.Noho izany, manoro hevitra anao izahay mba hahalalanao ny tsipika sela mahaliana anao ary araho tsara ny torolàlana omena ho an'ny vokatra tsirairay ampiasainao amin'ny fanandramanao.
2. Fiarovana amin'ny famoronana tontolo iainana kolontsaina sela ho an'ny selao:
Media kolontsaina sy serum (jereo eto ambany raha mila fanazavana fanampiny)
pH sy CO2 (jereo eto ambany raha mila fanazavana fanampiny)
Mamboly plastika (jereo eto ambany raha mila fanazavana fanampiny)
Temperature (jereo eto ambany raha mila fanazavana fanampiny)
2.1 Media ara-kolontsaina sy Serum
Ny fitaovana kolontsaina no ampahany manan-danja indrindra amin'ny tontolon'ny kolontsaina, satria manome ny otrikaina, ny fitomboana ary ny hormones ilaina amin'ny fitomboan'ny sela, ary mandrindra ny pH sy ny tsindry osmotika amin'ny kolontsaina.
Na dia natao tamin'ny alàlan'ny fampitam-baovao voajanahary azo avy amin'ny fitrandrahana tavy sy ny tsiranoka amin'ny vatana aza ny andrana voalohany amin'ny kolontsaina sela, dia nitarika ho amin'ny fampivoarana ny haino aman-jery voafaritra ny filana manara-penitra, ny kalitaon'ny haino aman-jery ary ny fitomboan'ny fangatahana.Ny karazana media fototra telo dia ny media basal, ny media serum mihena ary ny media tsy misy serum, ary samy hafa ny fepetra takiana amin'ny famenoana serum.
2.1.1 Fantenana fototra
Gibco cell culture medium
Ny ankamaroan'ny tsipika sela dia mitombo tsara amin'ny haino aman-jery fototra misy asidra amine, vitamina, sira inorganika, ary loharano karbonika (toy ny glucose), saingy tsy maintsy ampiana serum ireo fandrafetana media fototra ireo.
2.1.2 Ahena ny serum medium
Tavoahangy misy Gibco Low Serum Medium
Paikady iray hafa hampihenana ny voka-dratsin'ny serum amin'ny andrana momba ny kolontsaina sela dia ny fampiasana haino aman-jery mihena serum.Reduced serum medium dia raikipohy antonony fototra manankarena amin'ny otrikaina sy anton-javatra azo avy amin'ny biby, izay afaka mampihena ny habetsaky ny serum ilaina.
2.1.3 Serum tsy misy antonony
Tavoahangy misy fitaovana tsy misy serum Gibco
Ny fitaovana tsy misy serum (SFM) dia manodina ny fampiasana serum biby amin'ny fanoloana ny serum amin'ny fandrafetana sakafo sy hormonina mety.Kolontsaina fototra sy tsipika sela maro no manana fandrafetana antonony tsy misy serum, ao anatin'izany ny tsipika famokarana proteinina recombinant Chinese Hamster Ovary (CHO), tsipika sela hybridoma isan-karazany, tsipika bibikely Sf9 sy Sf21 (Spodoptera frugiperda), ary koa ho an'ny The host for virus production. (ohatra, 293, VERO, MDCK, MDBK), sns. Ny iray amin'ireo tombony lehibe indrindra amin'ny fampiasana fitaovana tsy misy serum dia ny fahafahana manao ny antonony mifantina ho an'ny karazana sela manokana amin'ny alàlan'ny fisafidianana ny fitambarana mety amin'ny fitomboana.Ity tabilao manaraka ity dia mitanisa ny tombony sy ny tsy fahampian'ny media tsy misy serum.
tombony
Ampitomboy ny mazava
Fampisehoana mirindra kokoa
Fanadiovana mora kokoa sy fanodinana ambany
Tombanana tsara ny fiasan'ny sela
Ampitomboy ny vokatra
Fifehezana tsara kokoa ny fanehoan-kevitra ara-batana
Fanamafisana ny haino aman-jery finday
tombon-dahiny
Fitakiana formula medium manokana karazana sela
Mila fahadiovana reagent ambony kokoa
Ny fihenan'ny fitomboana
2.2.1 pH
Ny ankamaroan'ny tsipika sela mampinono mahazatra dia mitombo tsara amin'ny pH 7.4, ary kely ny fahasamihafana eo amin'ny tsipika samihafa.Na izany aza, hita fa mitombo tsara kokoa ao anatin'ny tontolo misy asidra kely (pH 7.0 – 7.4) ny tsipika sela niovaova, fa ny tsipika sela fibroblast sasany ara-dalàna kosa dia maniry ny tontolo misy alkaline kely (pH 7.4 – 7.7).Ny tsipika selan'ny bibikely toy ny Sf9 sy Sf21 dia mitombo tsara indrindra amin'ny pH 6.2.
2.2.2 haavon'ny CO2
Ny fitaovana fitomboana dia mifehy ny pH amin'ny kolontsaina ary miaro ny sela ao amin'ny kolontsaina mba hanoherana ny fiovan'ny pH.Amin'ny ankapobeny, ity buffering ity dia azo amin'ny alàlan'ny fisian'ny buffer organika (ohatra, HEPES) na CO2-bicarbonate.Satria miankina amin'ny fifandanjan'ny gazy karbonika levona (CO2) sy ny bikarbonate (HCO3-) ny pH an'ilay fitaovana, dia hanova ny pH an'ilay fitaovana ny fiovan'ny CO2 ao amin'ny atmosfera.Noho izany, rehefa mampiasa buffered antonony miaraka amin'ny buffer mifototra amin'ny CO2-bikarbonate dia ilaina ny mampiasa CO2 exogenous, indrindra rehefa mamboly sela amin'ny lovia kolontsaina misokatra na mamboly tsipika sela niova amin'ny fifantohana avo.Na dia mampiasa 5-7% CO2 amin'ny rivotra aza ny ankamaroan'ny mpikaroka, ny ankamaroan'ny fanandramana kolontsaina sela dia matetika mampiasa 4-10% CO2.Na izany aza, ny fitaovana tsirairay dia manana fihenjanana CO2 natokana ho an'ny bikarbonate mba hahazoana ny pH marina sy ny tsindry osmotika;raha mila fanazavana fanampiny dia jereo ny torolalan'ny mpanamboatra antonony.
2.3 Fambolena plastika
Ny plastika kolontsaina sela dia misy amin'ny endrika isan-karazany, habe ary surface mifanaraka amin'ny fampiharana kolontsaina sela isan-karazany.Ampiasao ny torolàlana momba ny plastika kolontsaina sela sy ny torolàlana momba ny kolontsaina sela eto ambany mba hanampiana anao hisafidy ny plastika mety amin'ny fampiharana ny kolontsaina sela.
Jereo ny plastika kolontsaina sela Thermo Scientific Nunc rehetra (rohy dokam-barotra)
2.4 Temperature
Ny mari-pana tsara indrindra ho an'ny kolontsaina sela dia miankina betsaka amin'ny hafanan'ny vatan'ilay mpampiantrano izay mitokana ny sela, ary kely kokoa amin'ny fiovana anatomika amin'ny mari-pana (ohatra, ny hafanan'ny hoditra dia mety ho ambany noho ny an'ny hozatra taolana. ).Ho an'ny kolontsain'ny sela, olana lehibe kokoa ny overheating noho ny hafanana be loatra.Noho izany, ny mari-pana ao amin'ny incubator dia matetika ambany kely ny mari-pana tsara indrindra.
2.4.1 Ny mari-pana tsara indrindra ho an'ny tsipika sela isan-karazany
Ny ankamaroan'ny sela olombelona sy ny biby mampinono dia tazonina amin'ny 36°C hatramin'ny 37°C ho an'ny fitomboana tsara indrindra.
Ny selan'ny bibikely dia ambolena amin'ny 27 ° C ho an'ny fitomboana tsara indrindra;mitombo miadana kokoa izy ireo amin'ny mari-pana ambany kokoa sy ny mari-pana eo anelanelan'ny 27 ° C sy 30 ° C.Mihoatra ny 30°C, mihena ny herin’ny selan’ny bibikely, na dia miverina amin’ny 27°C aza, dia tsy ho tafarina intsony ny sela.
Mila 38,5°C ny tsipika sela aviavy mba hahatratrarana ny fitomboana ambony indrindra.Na dia azo tazonina amin’ny 37°C aza ireo sela ireo, dia hitombo miadana kokoa izy ireo.
Ny tsipika sela avy amin'ny biby mangatsiaka (toy ny amphibians, trondro an-drano mangatsiaka) dia afaka mandefitra ny mari-pana midadasika 15°C hatramin'ny 26°C.
Fotoana fandefasana: Feb-01-2023